POTENCIALES CIRCUITOS REGULATORIOS ENTRE miRNAs, MITF Y HIF1α EN LA LÍNEA CELULAR DE MELANOMA B16 BAJO CONDICIONES DE SUPRESIÓN DE CRECIMIENTO CELULAR E HIPOPIGMENTACIÓN INDUCIDOS.
<p>El melanoma es un cáncer de melanocitos, células especializadas en la síntesis de melanina, que muestra variación en la expresión de moléculas como RNAs mensajeros (mRNAs), factores de transcripción y microRNAs (miRNAs), entre otras. Los miRNAs son RNAs pequeños no codificantes entre los 18-22 nt, asociados con la regulación de cerca del 30% de los genes que codifican para proteínas, incluidos factores de transcripción, tanto en condiciones fisiológicas, como fisiopatológicas. A su vez, los factores de transcripción regulan la expresión de cientos de genes, incluidos los miRNAs; sin embargo, a la fecha, la asociación funcional entre estos tres actores moleculares y el fenotipo tumoral no es del todo clara. El objetivo de la presente investigación fue evaluar la expresión de miRNAs y de los mRNAs de los factores de transcripción Mitf y Hif1α en la línea celular de melanoma B16F1 expuesta a la 5-bromo-2´-deoxiuridina (5-Br-2’-dU), y plantear potenciales circuitos regulatorios asociados al fenotipo de hipopigmentación y disminución de la proliferación celular. Para ello, células B16F1 fueron expuestas a 5-Br-2’-dU 2.5 µg.mL-1 durante 72 horas, en medio DMEM (Dulbecco Modified Eagle Medium) a 37°C y 5% de CO2. Mediante small RNAseq se determinó la expresión diferencial de miRNAs maduros, mientras que la predicción de sus blancos moleculares, Mitf y Hif1α se realizó por TargetScanMouse versión 7.2. La expresión fue confirmada para los miRNAs miR-211-5p, miR-138-5p, miR-129-5p, miR-470-5p y miR-470-3p por RT-qPCR stem loop con un N= 3 y establecida para Mitf y Hif1α por RT-qPCR con un N=4; en todos los casos, el nivel de significación (*) fue determinado mediante una prueba t-Student a dos colas con corrección del Welch y las diferencias fueron consideradas como estadísticamente significativas para un valor p <0.05, ns: no significativo. Usando DEseq2, se analizaron los conteos obtenidos por small RNAseq y se determinó la expresión diferencial de 33 miRNAs por exposición a 5-Br-2’-dU, 11 sobre-expresados y 21 sub-expresados. Se confirmó por RT-qPCR el nivel de expresión de cinco miRNAs, dos de ellos a la baja (miR-211-5p (2.2X) y 138-5p (2.8X) y tres al alta (miR-129-5p (1.5X), miR-470-5p (22.7X) y miR-470-3p (124X)). El nivel de expresión de los mRNAs Mitf y Hif1α, se encontró para ambos a la baja (3.48X y, 4.58X, respectivamente). El análisis bioinformático por TargetScanMouse facilitó la construcción de potenciales circuitos regulatorios entre los miRNAs diferencialmente expresados y los factores Mitf y Hif1α para el fenotipo de hipopigmentación y disminución de la proliferación celular inducidos por la 5-Br-2’-dU. Los resultados obtenidos, plantean nuevos escenarios en el estudio del melanoma y mejoran nuestra comprensión de las potenciales asociaciones funcionales entre conjuntos de miRNAs, factores de transcripción como MITF y HIF1α y algunos genes que participan en el control de la pigmentación y la proliferación celular; sin embargo, se requiere establecer mediante ensayos de gen reportero de la luciferasa y otros ensayos funcionales, donde se usen estrategias como miRNAs miméticos y antimiRs, si para los circuitos regulatorios planteados, existe asociación funcional.</p>
ShareScore
36/100
Overall dataset sharing score
Score breakdown
These five areas show where the dataset supports — or may limit — practical reuse.
- Stewardship
- 8
- Harmonization
- 4
- Access
- 16
- Reuse readiness
- 8
- Engagement
- 0